急性白血病病外周血个核细胞端粒酶活性定量分析
NA产物与荧光染料PicoGreen结合，在激发波长为480rim，发射波长为520nm条件下，根据 荧光强度测定DNA浓度。PicoGreen能特异结合双链DNA(dsDNA)，灵敏度高，检测范围广， 可检测到低至25pg／m[的dsDNA，在25pg／ml1OOOng／m[浓度范围内荧光强度与dsDNA浓度呈线性关系；受盐类、有机溶剂、去垢剂、蛋白等的影响很小；对RNA和 单链DNA的结合量很低，不足影响荧光强度值，是分析dsDNA的理想试剂。通过检测TK&P中单位蛋白所 产生的dsDNA量。简单，快速地定量检测组织或细胞中的端粒酶活性。端粒酶几乎在各种人类恶性肿瘤细胞中 均有不同程度的表达，总的表达率在85％左右。代谢活跃的正常组织细胞也有端粒酶表达，如生殖细胞、外周血 自细胞、增生的上皮等。但这些组织细胞的端粒酶活性都较低，故对血液系统的端粒酶活性检测更需要定量的方法 。本研究采用TRAPPicoGreen方法定量分析了20例正常人和25例急性自血病病人外周血单个核细 胞的端粒酶活性，两组结果比较差异非常显著,polo ralph lauren。同时可看出，两组个体之间的变异都很大，25例病人中有3例的端粒酶活性值低于正常人平均值，可能与病情 发展阶段有关，这3例都属于初发，与其他文献报道一致_5J。正常人外周血也可检出较低水平的端粒酶活性， 与往文献报道也一致：。本实验在TRAP反应液中用亚精胺替代T4932蛋白(T4gene32口rote tn)，达到同样效果,mbt schuhe，而亚精胺国内易于购买到。另外，用ACX引物替代CX，优点有：显著减少引物二聚体的形成,ralph lauren polo，CX与TS的引物二聚体与端粒酶产物在聚丙烯酰胺凝胶电脉上几乎没有区别，反映了端粒酶真正的活性，AC X的5端I94加帽，PCR第一个循环后．阻止了端粒酶产物3端的继续延伸。此方法操作简便，省 时和敏感,moncler pas cher，并且可以定量，尤其适用于穿刺活检、外周血、胸腹水、腹腔或膀胱冲洗液等细胞的端粒酶活性检 测,ralph lauren home。